1. Tikslas: Šios procedūros tikslas – pateikti standartizuotą aseptinių operacijų ir sterilių patalpų apsaugos procedūrą.
2. Taikymo sritis: biologinių tyrimų laboratorija
3. Atsakingas asmuo: kokybės kontrolės vadovas testuotojas
4. Apibrėžimas: nėra
5. Saugos priemonės
Griežtai laikykitės aseptinių procedūrų, kad išvengtumėte mikrobų užteršimo; prieš įeidami į sterilią patalpą, operatoriai turėtų išjungti UV lempą.
6. Procedūros
6.1. Sterilioje patalpoje turi būti įrengta sterili operacinė ir buferinė patalpa. Sterilios operacinės švaros klasė turi siekti 10000. Patalpų temperatūra turi būti palaikoma 20–24 °C, o drėgmė – 45–60 %. Švaraus stalo švaros klasė turi siekti 100.
6.2. Sterilus kambarys turi būti švarus, griežtai draudžiama kaupti šiukšles, kad būtų išvengta užteršimo.
6.3. Griežtai venkite visos sterilizavimo įrangos ir kultūros terpių užteršimo. Užteršti asmenys turėtų nustoti juos naudoti.
6.4. Sterilioje patalpoje turėtų būti darbinės koncentracijos dezinfekavimo priemonių, tokių kaip 5 % krezolio tirpalas, 70 % alkoholio, 0,1 % chlormetionino tirpalas ir kt.
6.5. Sterilus patalpos turi būti reguliariai sterilizuojamos ir valomos atitinkamais dezinfekavimo priemonėmis, siekiant užtikrinti, kad sterilaus kambario švara atitiktų reikalavimus.
6.6. Visi instrumentai, įrankiai, indai ir kiti daiktai, kuriuos reikia įnešti į sterilią patalpą, turi būti sandariai suvynioti ir sterilizuoti tinkamais metodais.
6.7. Prieš įeidami į sterilią patalpą, darbuotojai privalo nusiplauti rankas muilu arba dezinfekavimo priemone, o tada buferinėje patalpoje persirengti specialiais darbo drabužiais, apsiauti batais, apsivilkti kepures, kaukes ir pirštines (arba dar kartą nusivalyti rankas 70 % etanoliu). Operacijos atliekamos bakterijų kameroje.
6.8. Prieš naudojant sterilų kambarį, jame esanti ultravioletinė lempa turi būti įjungta apšvitinimui ir sterilizavimui ilgiau nei 30 minučių, o švarus stalas tuo pačiu metu turi būti įjungtas oro pūtimui. Baigus operaciją, sterilų kambarį reikia laiku išvalyti ir 20 minučių sterilizuoti ultravioletiniais spinduliais.
6.9. Prieš apžiūrą, bandinio išorinė pakuotė turi būti nepažeista ir negali būti atidaryta, kad būtų išvengta užteršimo. Prieš apžiūrą išoriniam paviršiui dezinfekuoti naudokite 70 % alkoholio turinčius vatos kamuoliukus.
6.10. Kiekvienos operacijos metu turėtų būti atliekama neigiama kontrolė, siekiant patikrinti aseptinio veikimo patikimumą.
6.11. Bakterijų skystį reikia sugerti naudojant siurbimo rutulį. Burna tiesiogiai nelieskite šiaudelio.
6.12. Inokuliacijos adata prieš ir po kiekvieno naudojimo turi būti sterilizuojama liepsna. Atvėsinus kultūrą galima inokuliuoti.
6.13. Šiaudelius, mėgintuvėlius, Petri lėkšteles ir kitus indus su bakteriniu skysčiu dezinfekavimui reikia pamirkyti sterilizavimo kibire su 5 % Lysol tirpalu, o po 24 valandų išimti ir išskalauti.
6.14. Jei ant stalo ar grindų išsiliejo bakterinis skystis, nedelsdami užpilkite užterštą vietą 5 % karbolio rūgšties tirpalu arba 3 % lizolio tirpalu ir palaikykite bent 30 minučių prieš apdorodami. Kai darbo drabužiai ir kepurės užteršiami bakteriniu skysčiu, juos reikia nedelsiant nusivilkti ir išskalbti po sterilizavimo aukšto slėgio garais.
6.15. Visi daiktai, kuriuose yra gyvų bakterijų, prieš skalaujant po tekančiu vandeniu, turi būti dezinfekuojami. Griežtai draudžiama teršti kanalizaciją.
6.16. Kolonijų skaičius sterilioje patalpoje turėtų būti tikrinamas kas mėnesį. Atidarius švarų stalą, paimkite keletą sterilių Petri lėkštelių, kurių vidinis skersmuo yra 90 mm, ir aseptiškai sušvirkškite apie 15 ml ištirpintos ir iki maždaug 45 °C atvėsintos maistinės agaro kultūros terpės. Sukietėjus, apverskite lėkšteles aukštyn kojomis 30–35 °C temperatūroje. Inkubuokite 48 valandas ℃ temperatūros inkubatoriuje. Įrodę sterilumą, paimkite 3–5 lėkšteles ir padėkite jas kairėje, viduryje ir dešinėje darbinės padėties pusėse. Atidarę dangtelį ir palaikę jas 30 minučių, 48 valandoms apverskite jas aukštyn kojomis 30–35 °C temperatūros inkubatoriuje ir išimkite. Apžiūrėkite. Vidutinis įvairių bakterijų skaičius lėkštelėje 100 klasės švarioje patalpoje neturi viršyti 1 kolonijos, o vidutinis skaičius 10000 klasės švarioje patalpoje neturi viršyti 3 kolonijų. Jei riba viršijama, sterili patalpa turi būti kruopščiai dezinfekuojama, kol pakartotiniai patikrinimai atitiks reikalavimus.
7. Žr. skyrių (Sterilumo tikrinimo metodas) leidiniuose „Vaistų higienos tikrinimo metodai“ ir „Kinijos standartinė vaistų tikrinimo veiklos praktika“.
8. Platinimo skyrius: Kokybės valdymo skyrius
Švarių patalpų techninės instrukcijos:
Sukūrę sterilią aplinką ir sterilias medžiagas, turime palaikyti sterilią būseną, kad galėtume tirti konkretų žinomą mikroorganizmą arba panaudoti jo funkcijas. Priešingu atveju įvairūs mikroorganizmai iš išorės gali lengvai susimaišyti. Mikrobiologijoje nesusijusių mikroorganizmų iš išorės susimaišymo reiškinys vadinamas užteršiančiomis bakterijomis. Užteršimo prevencija yra labai svarbi mikrobiologinio darbo technika. Visiškas sterilizavimas, viena vertus, ir užteršimo prevencija, kita vertus, yra du aseptikos technikos aspektai. Be to, turime užkirsti kelią tiriamiems mikroorganizmams, ypač patogeniniams mikroorganizmams arba genetiškai modifikuotiems mikroorganizmams, kurie gamtoje neegzistuoja, patekti iš mūsų eksperimentinių talpyklų į išorinę aplinką. Šiems tikslams mikrobiologijoje yra daug priemonių.
Sterilus kambarys paprastai yra mažas, specialiai mikrobiologijos laboratorijai įrengtas kambarys. Jis gali būti pastatytas iš lakštų ir stiklo. Plotas neturėtų būti per didelis, apie 4–5 kvadratinius metrus, o aukštis turėtų būti apie 2,5 metro. Už sterilaus kambario ribų turėtų būti įrengtas buferinis kambarys. Buferinio kambario ir sterilaus kambario durys neturėtų būti nukreiptos ta pačia kryptimi, kad oro srautas nepatektų į įvairias bakterijas. Tiek sterilus, tiek buferinis kambarys turi būti sandarūs. Patalpų vėdinimo įranga turi turėti oro filtravimo įrenginius. Sterilaus kambario grindys ir sienos turi būti lygios, sunkiai kaupiančios nešvarumus ir lengvai valomos. Darbo paviršius turi būti lygus. Tiek steriliame, tiek buferiniame kambaryje yra ultravioletiniai šviestuvai. Ultravioletiniai šviestuvai steriliame kambaryje yra 1 metro atstumu nuo darbo paviršiaus. Į sterilų kambarį įeinantis personalas turi dėvėti sterilizuotus drabužius ir kepures.
Šiuo metu sterilios patalpos dažniausiai naudojamos mikrobiologijos gamyklose, o bendrose laboratorijose naudojami švarūs stalai. Pagrindinė švaraus stalo funkcija – laminarinio oro srauto įtaisu pašalinti įvairias smulkias dulkes, įskaitant mikroorganizmus, nuo darbo paviršiaus. Elektrinis įtaisas leidžia orui praeiti pro HEPA filtrą ir patekti į darbo paviršių, kad darbo paviršius visada būtų kontroliuojamas sterilaus oro srauto. Be to, išorinėje pusėje yra greitaeigė oro užuolaida, kuri neleidžia patekti bakteriniam orui iš išorės.
Sudėtingomis sąlygomis vietoj švaraus stalo galima naudoti ir medines sterilias dėžutes. Sterili dėžutė yra paprastos konstrukcijos ir lengvai perkeliama. Dėžutės priekyje yra dvi skylės, kurios neveikiant užblokuojamos stumiamomis durelėmis. Naudojimo metu galite ištiesti rankas. Viršutinė priekinė dalis yra su stiklu, kad būtų lengviau valdyti vidų. Dėžutės viduje yra ultravioletinė lempa, o indus ir bakterijas galima įdėti pro mažas šonines dureles.
Aseptinės operacinės technologijos šiuo metu vaidina pagrindinį vaidmenį ne tik mikrobiologiniuose tyrimuose ir taikymuose, bet ir yra plačiai naudojamos daugelyje biotechnologijų. Pavyzdžiui, transgeninėje technologijoje, monokloninių antikūnų technologijoje ir kt.
Įrašo laikas: 2024 m. kovo 6 d.